Xác nhận phương pháp phát hiện gen Nopaline synthanse terminator trong nền sữa bằng kỹ thuật Real-time Polymerase Chain Reaction

Tóm tắt

Nopaline synthase terminator (T-nos) là trình tự kết thúc phiên mã có nguồn gốc từ plasmid Ti (gây khối u) của Agrobacterium tumefaciens, được biết đến là một loại vi khuẩn đất có khả năng gây khối u trên thực vật. Trong lĩnh vực công nghệ sinh học thực vật, T-nos được sử dụng rộng rãi như một thành phần chức năng trong các cassette biểu hiện gen nhằm điều khiển hoạt động của các transgene trong cây trồng biến đổi gen. Việc sử dụng T-nos đảm bảo rằng quá trình phiên mã được kết thúc đúng vị trí, giúp tạo ra các phân tử mRNA ổn định và có khả năng dịch mã hiệu quả, từ đó tăng cường biểu hiện của gen mục tiêu. Nhờ tính tương thích cao với hệ thống biểu hiện trong thực vật và khả năng hoạt động ổn định trong nhiều loài cây khác nhau, T-nos đã trở thành một trình tự kết thúc chuẩn mực trong thiết kế vector chuyển gen thực vật. Phương pháp được sử dụng thường xuyên nhất để phát hiện sự hiện diện của vật liệu biến đổi gen trong các thực phẩm là sàng lọc trình tự Deoxyribonucleic acid (DNA) khởi động CaMV 35S và trình tự DNA kết thúc nos dựa trên kỹ thuậtPCR. Nghiên cứu này nhằm xây dựng phương pháp phát hiện gen T-nos (84 bp) trong nền sữa bằng kỹ thuật real time PCR kết hợp với đầu dò T-nos. Các vật liệu tham chiếu được chứng nhận có chứa đậu nành Roundup Ready GTS 40-3-2 và NK603 đã được sử dụng để phát triển và tối ưu hóa phương pháp. Phương pháp được đánh giá có độ nhạy cao với giới hạn phát hiện là 0,05%, độ đặc hiệu và độ chính xác đều đạt 100%.