Thiết lập phản ứng multiplex PCR phát hiện đồng thời 4 gen mã hóa độc tố Clostridium botulinum 4 serotype: A, B, E, F
Tóm tắt
Clostridium botulinum là vi khuẩn Gram dương kỵ khí, sinh bào tử, có khả năng sinh độc thần kinh botulinum, có 4 serotype: A, B, E, F được biết đến có khả năng gây độc cho người. Từ năm 2020, hàng trăm ca đã lần đầu tiên được báo cáo ở Việt Nam. Các phương pháp nuôi cấy bao gồm xét nghiệm sinh học trên chuột thường mất nhiều tuần, dẫn đến việc bệnh nhân không được điều trị kịp thời. Do đó, các xét nghiệm khuếch đại axit nucleic (NAAT) sử dụng các đoạn mồi đặc hiệu đã trở thành một giải pháp thay thế đầy hứa hẹn. Trong nghiên cứu này, nhóm nghiên cứu đã lựa chọn bốn cặp mồi có kích thước 240 bp, 205 bp, 140 bp và 415 bp tương ứng với 4 gen đích mã hóa BoNT/A, /B, /E và /F để phân tách bằng phương pháp điện di agarose thông thường. Chu trình nhiệt được sửa đổi bằng việc kết hợp bước ủ và kéo dài cho phép hoàn thành phản ứng PCR đa mồi trong một giờ. Độ đặc hiệu phân tích của phương pháp cũng được đánh giá dựa trên hai chủng cùng chi Clostridium và sáu chủng khác chi Clostridium. Giới hạn phát hiện của phương pháp được xác định là 103 bản sao/ μL đối với các nhóm A, B, E với cả plasmid tinh khiết và DNA được chiết xuất từ nền mẫu. Tổng thời gian của quy trình đã thiết lập là 1,5 giờ, bao gồm cả điện di.