Sinh tổng hợp tái tổ hợp và đánh giá đặc tính miễn dịch của kháng thể miền đơn nanobody với độc tố thần kinh botulinum serotype A và B

Tóm tắt

Nanobody là các kháng thể miền đơn (single domain, VHH) được tổng hợp tái tổ hợp dựa trên trình tự của các kháng thể chỉ chứa chuỗi nặng được phân lập ở lạc đà và cá mập. Nanobody hiện đang được dùng như là một giải pháp mới cho việc làm tăng khả năng nhận biết cũng như là trung hòa các loại độc tố thực phẩm. Botulinum neurotoxin (BoNT) là một loại độc tố thần kinh nguy hiểm do C. botulinum sinh ra, được tìm thấy trong các mẫu thực phẩm, có khả năng gây ngộ độc với lượng rất nhỏ khoảng 1 - 2 ng/kg, đặt ra một yêu cầu về việc phát triển các phương pháp phát hiện với độ nhạy cao. Trong nghiên cứu này, tái tổ hợp nanobody ALc-B8 (A8) và JNE-B10 (J10) gắn đặc hiệu với chuỗi nhẹ của độc tố thần kinh BoNT type A (BoNT/A) và type B (BoNT/B) đã được tổng hợp, ứng dụng trong phát hiện và trung hòa độc tố. Nanobody A8 (33 kDa) và J10 (32 kDa) sử dụng vector pET28a trên chủng vi khuẩn E.coli BL21 (DE3) RIL với điều kiện bổ sung IPTG 0,5 mM tại OD₆₀₀ khoảng 0,6 - 0,8 và sinh khối được thu sau 16 - 18 giờ cảm ứng ở 16°C. Nanobody A8 và J10 sau khi tinh sạch với hiệu quả 10 - 20 mg nanobody/L nuôi cấy và có khả năng nhận biết đặc hiệu với chuỗi nhẹ BoNT/A và BoNT/B tái tổ hợp ở nồng độ 100 μg/mL bằng phương pháp Western blotting. Kết quả này là tiền đề cho việc ứng dụng 2 nanobody này vào mục đích phát hiện và trung hoà độc tố botulinum.