TINH SẠCH VÀ XÁC ĐỊNH ĐẶC TÍNH CỦA LACCASE TÁI TỔ HỢP TỪ ASPERGILLUS NIGERD15#26 lcc1 1.8B

Tóm tắt

Laccase là một enzym có ứng dụng công nghiệp rất rộng rãi. Laccase  từ  Trametes versicolor là enzym có thế oxy hóa khử lớn và là nguồn gen hấp dẫn cho nghiên cứu biểu hiện enzym. Laccase 1 từ  T. Versicolor 06  được biểu hiện trong  A. niger D15#26  lcc1 1.8B, với cơ chất cảm ứng là glucose, đạt hoạt độ cao nhất 4250 U/L sau 7 ngày nuôi ở tốc độ lắc 200v/phút, pH 6. Laccase tái tổ hợp đã được tinh chế nhờ kết tủa phân đoạn với ammonium sulfate 40 % - 80 % bão hòa  ở 4 ^oC và sắc kí trên cột Hitrap Q Fast Flow với gradien NaCl 0 – 1 M,  đạt hiệu suất thu hồi enzym 26 %, hoạt  độ riêng 34,7 U/mg protein, tăng 41,19 lần so với enzym thô. Laccase tinh sạch có khối lượng phân tử 70 kDa, phản  ứng tối  ưu  ở nhiệt  độ 450C và pH 4. Enzym bền trong khoảng nhiệt độ từ 30 – 35⁰C và pH 4 - 6. Các thông số động học của laccase trong phản ứng với ABTS là K_m 1,35 µM; V_max 53,14 M/phút^-1; Kcat 10,42 × 10 ⁶s -1 và K_cat/Km 7,72 × 10⁶ µM^-1s^-1cho thấy enzyme hoạt động hiệu quả trong oxy hóa cơ chất ABTS.