Tạo dòng gene mã hóa enzyme Sphingosine 1-phosphate Lyase ở người (SGPL1)

Tóm tắt

    Sphingosine 1-phosphate (S1P) là loại phân tử lipid có hoạt tính sinh học quan trọng trong việc điều khiển phân bào, sự vận động của các tế bào miễn dịch và trong điều hòa sinh mạch. Sphingosine 1- phosphate lyase (SGPL1) là enzyme phân giải S1P bằng cách cắt chuỗi acyl ở vị trí carbon số 2 và 3, để tạo thành hexdecenal và ethanolamin phosphate, vì thế enzyme này là một trong những yếu tố tham gia điều hòa lượng S1P trong tế bào và cơ thể. Trong tế bào động vật có vú, SGPL1 còn phân hủy một cơ chất khác là dihydro-S1P (dhS1P), một đồng phân no của S1P được tạo ra trong quá trình tổng hợp mới sphingolipid khởi đầu bằng quá trình ngưng tụ serin và palmitoyl-CoA. Cho đến nay, dhS1P và S1P vẫn được sử dụng thay thế cho nhau với giả định cả hai đều đáp ứng hoàn toàn như nhau với hoạt tính enzyme của SGPL1. Mặc dù vậy, hai cơ chất này thể hiện những tác động sinh học trái ngược nhau và phản ứng khác nhau với các tác nhân môi trường và thuốc điều trị ung thư. Để hiểu rõ hơn về động học enzym của SGPL1 đối với hai cơ chất này, chúng tôi đã tạo dòng trình tự mã hóa SGPL1 của người (hSGPL1) vào vector pQ60 của hệ thống biểu hiện vi khuẩn. Vector tái tổ hợp mang hSGPL1 này sẽ cung cấp nguyên liệu để biểu hiện và tinh sạch enzyme SGPL1 phục vụ cho các nghiên cứu tính đặc hiệu và hiệu quả của nó lên hai cơ chất dhS1P và S1P trong tương lai.