Tạo và thu nhận chọn lọc kháng thể IgG kháng protein màng của tế bào T Jurkat

Tóm tắt

Hiện nay, vật ghép chống chủ (GvHD) vẫn là rào cản lớn nhất trong ứng dụng ghép tủy dị cá thể để hỗ trợ điều trị bệnh ung thư máu. Vật ghép chống chủ được gây ra do tế bào T trưởng thành của người cho tấn công mô và cơ quan người nhận. Loại bỏ tế bào T bằng hạt từ miễn dịch là một trong những phương pháp hiệu quả nhất để khắc phục GvHD. Trong nghiên cứu này, kháng thể đa dòng kháng tế bào T Jurkat được tạo ra như nguồn nguyên liệu cho việc tạo hạt từ miễn dịch hỗ trợ loại bỏ tế bào T. Đầu tiên, màng tế bào T Jurkat được thu nhận bằng phương pháp ly trích điểm sương sử dụng Triton X-114. Tiếp theo, phân đoạn màng được sử dụng để kích thích đáp ứng miễn dịch ở thỏ với lượng 50 μg ở lần đầu tiên và 25 μg ở bốn lần nhắc sau. Huyết thanh thu nhận được ở lần tiêm nhắc cuối được tủa trong dung dịch 50 % ammonium sulfate bão hòa để thu kháng thể. Theo đó, kháng thể được tinh sạch bằng cột sắc kí ái lực protein A và phân tích độ tinh sạch bằng điện di SDS‑PAGE. Sau đó, kháng thể tinh sạch được nhuộm miễn dịch huỳnh quang trên tế bào T Jurkat và quan sát kết quả dưới kính hiển vi huỳnh quang nhằm xác định khả năng bắt tế bào T Jurkat. Cuối cùng, kháng thể tiếp tục được chọn lọc âm tính với tế bào TF-1, dòng tế bào gốc tạo máu, nhằm loại bỏ các kháng thể kháng tế bào TF-1. Kết quả cho thấy kháng thể đa dòng thu được có khả năng nhận diện yếu tế bào TF-1 và nhận diện mạnh tế bào T Jurkat.