TỐI ƯU HÓA QUY TRÌNH PHÁT HIỆN Hepatopancreatic parvovirus (HPV) VÀ Monodon baculovirus (MBV) TRÊN TÔM BẰNG PHƯƠNG PHÁP DUPLEX REALTIME PCR

Tóm tắt

MBV (Monodon baculovirus) và HPV (Hepatopancreatic parvovirus) đều là virus ký sinh trên tế bào biểu bì gan tụy và tế bào biểu bì ruột của tôm, gây chết tôm ở giai đoạn ấu trùng Zoea, mysis và tôm giống nhỏ,… nên ảnh hưởng nghiêm trọng đến ngành công nghiệp nuôi tôm. Vì vậy, nghiên cứu này đã phát triển quy trình duplex realtime PCR bằng cách sử dụng đầu dò TaqMan để phát hiện nhanh và chính xác đồng thời monodon baculovirus (MBV) và hepatopancreatic parvovirus (HPV) trong cùng 1 phản ứng. Sau quá trình tối ưu các thành phần và điều kiện cần thiết như tỉ lệ mồi HPVth/MBV 400 nM/400 nM, tỉ lệ probe HPV-P1/MBV-P1 là 300 nM/300 nM với điều kiện phản ứng như sau: 94ºC trong 5 phút, tiếp theo 94ºC trong 15 giây, 60ºC trong 60 giây, chu kỳ này được lặp lại 40 lần. Kết quả nghiên cứu cho thấy phương pháp được xây dựng có độ đặc hiệu (SP) đạt 100%; độ chính xác (AC) đạt 100%; độ nhạy (SE) đạt 100%; tỷ lệ âm tính giả 0% và tỷ lệ dương tính giả 0%, LOD₅₀ là 5 copy/phản ứng.