NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN NHANH VI KHUẨN Salmonella spp. TRÊN NỀN MẪU THỊT BẰNG PHƯƠNG PHÁP LOOP MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION (LAMP)

Tóm tắt

Salmonella là một trong những vi khuẩn gây ra ngộ độc thực phẩm và phân lập ở hầu hết thực phẩm. Mục tiêu của nghiên cứu này là thiết lập được quy trình phát hiện nhanh vi khuẩn Salmonella spp. trên nền mẫu thịt bằng phương pháp Loop Mediated Isothermal Amplification (LAMP)  đặc hiệu với gen invA, đáp ứng yêu cầu ứng dụng phân tích. Kết quả nghiên cứu đã xây dựng được quy trình phân tích trực tiếp Salmonella từ mẫu thịt dựa trên phản ứng LAMP, bao gồm: (1) tăng sinh mẫu (25 g) trong môi trường (150 ml dung dịch đệm pepton: 75 ml canh thang RVS), trong thời gian 10 giờ trên nền mẫu thịt tươi; cải tiến phương pháp tách chiết nhanh thu DNA từ dịch tăng sinh mẫu thực phẩm đó là sử dụng đệm NaOH 100 mM, gia nhiệt 5 phút tại 95°C, siêu âm 30 giây, ly tâm 10.000 vòng/phút trong 2 phút thu dịch DNA cho phản ứng LAMP. Kết quả nghiên cứu cho thấy phương pháp được xây dựng có độ đặc hiệu (SP) đạt 94%; độ chính xác (AC) đạt 94%; độ nhạy (SE) đạt 100%; tỷ lệ âm tính giả 0% và tỷ lệ dương tính giả 6%, LOD₅₀ là 3 CFU/25g. Hiệu quả phân tích Salmonella bằng phương pháp LAMP được được xây dựng tương đương với phương pháp nuôi cấy theo TCVN 10780-1:2017 (ISO 6579-1:2017) trên nền mẫu thịt nhưng có kết quả cho thời gian phân tích ngắn khoảng 10 giờ.