PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH KIỂU GEN VÀ TẦN SỐ ALEN CỦA ĐA HÌNH NUCLEOTIDE ĐƠN RS12970134 GẦN THỤ THỂ MELANOCORTIN-4 Ở TRẺ MẦM NON TẠI HÀ NỘI

Tóm tắt

Thụ thể Melanocortin-4 có liên quan đến bệnh béo phì, kháng insulin do đóng vai trò quan trọng trong việc điều hòa lượng thức ăn ăn vào, cân bằng nội môi và khối lượng cơ thể. Mục tiêu của nghiên cứu này là xây dựng được phương pháp AS-PCR phân tích kiểu gen của đa hình nucleotide đơn rs12970134 gần thụ thể Melanocortin-4 và xác định tỉ lệ alen của đa hình nucleotide đơn này ở trẻ em 3-5 tuổi tại Hà Nội. Nghiên cứu đã thiết kế được các đoạn mồi để xác định alen của đa hình nucleotide đơn rs12970314 gồm mồi xuôi phát hiện alen G: 5'-tcttaccaaacaaagcatgtg-3', phát hiện alen A: 5'-tcttaccaaacaaagcatgta-3'; và mồi ngược: 5'-gtcattcccactaccacctg-3'. Chu trình nhiệt của phản ứng PCR được tối ưu hóa là: 94^oC (3 phút) và 34 chu kỳ: biến tính ở 94^oC (30 giây), gắn mồi ở 54^oC (40 giây), kéo dài ở 72^oC (30 giây), bước kéo dài cuối ở 72^oC (8 phút), kết thúc ở 4^oC. Sản phẩm PCR 208 bp được phát hiện trên gel agarose 2,5% nhuộm redsafe. Kiểu gen được kiểm tra bằng phương pháp giải trình tự gen. Trong toàn bộ mẫu, tỉ lệ kiểu gen GG là lớn nhất (57,5%) và AA là thấp nhất (4%). Tần số của các alen G và A lần lượt là 0,77 và 0,23.