Xây dựng quy trình định lượng nystatin bằng phương pháp HPLC
Tóm tắt
Nystatin (nystatin A1) là một chất kháng nấm thuộc nhóm polyen, được sinh tổng hợp bởi chủng vi khuẩn Streptomyces noursei (Streptomycetaceae). Nystatin thường được dùng tại chỗ trong phòng ngừa và điều trị các bệnh nhiễm Candida như Candida miệng, hầu họng.
Theo một số Dược điển hiện hành như Dược điển Việt Nam V, Dược điển Mỹ (USP 41) và Châu Âu (EP 8), các chế phẩm nystatin cũng như một số chất kháng nấm khác được định lượng thông qua hoạt tính sinh học bằng phương pháp khuếch tán trên thạch. Đây là một phương pháp khá đơn giản, không đòi hỏi thiết bị phức tạp và có thể đánh giá được chính xác hoạt lực của kháng sinh nhưng đòi hỏi nhiều thời gian, sai số ngẫu nhiên cao, quá trình xử lý số liệu phức tạp. Khắc phục nhược điểm trên, một số quy trình HPLC đã được đề xuất để định lượng nystatin trong dạng bào chế viên nén hay dịch sinh học. Mục tiêu của nghiên cứu này là xây dựng và thẩm đinh một quy trình HPLC nhằm định lượng nystatin trong mẫu thử nghiệm tự tạo, có thể ứng dụng trong quá trình nghiên cứu thuốc.
Nguyên liệu
- Hoá chất, dung môi, chất chuẩn: Chất chuẩn nystatin (QT033 080217), hàm lượng 5609 IU/mg; Nystatin, hàm lượng 6420 IU/mg; Hóa chất, dung môi đạt tiêu chuẩn dùng trong sắc ký lỏng; Môi trường M19 (AgarCultTM ECO, Alphachem-Việt Nam) dùng trong đánh giá hoạt tính sinh học của nystatin. Chủng vi sinh vật thử nghiệm: Saccharomyces serevisiae ATCC 2601.
- Đối tượng nghiên cứu
Mẫu thử: Mẫu tự tạo hỗn dịch nystatin 100000 IU/ml gồm nystatin và các tá dược đạt tiêu chuẩn dược dụng hoặc cơ sở gồm hydroxyethyl acrylate (Seppic - Trung Quốc), glycerin (Chemsol - Việt Nam), polysorbat 20 (Guangdong - Trung Quốc).
Mẫu placebo: Thành phần giống mẫu thử nhưng không chứa nystatin.
Trang thiết bị: Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao đầu dò PDA; Cột sắc ký Phenomenex RP; Cân phân tích; bể siêu âm;
Phương pháp nghiên cứu
- Thăm dò điều kiện sắc ký.
- Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng nystatin trong hỗn dịch.
Kết luận
Kết quả đánh giá tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ lặp lại và độ đúng đều đạt theo hướng dẫn của ICH. Vì vậy, quy trình này có thể được ứng dụng để định lượng chế phẩm nystatin trong quá trình nghiên cứu thuốc.
