TẠO DÒNG, BIỂU HIỆN VÀ TINH SẠCH PROTEIN TÁI TỔ HỢP ĐOẠN ĐẦU PROTEIN TOXA CỦA PASTEURELLA MULTOCIDA

Tóm tắt

Những nghiên cứu trước đây đã chứng minh toxA là gen độc tố chính của Pasteurella multocida. Vì vậy protein ToxA là một yếu tố tiềm năng cho các nghiên cứu chế tạo vacxin tái tổ hợp phòng bệnh tụ huyết trùng lợn. Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành tạo dòng và biểu hiện đoạn gen 1,4kb của ToxA mã hóa trình tự axit amin từ 1 đến 487 (Tox1) trên vector biểu hiện pET32b trong Escherichia coli BL21 (DE3). Protein tái tổ hợp Tox1 được biểu hiện mạnh khi cảm ứng với IPTG 1mM và ethanol 3%. Sử dụng cột sắc ký ái lực Ni-NTA, chúng tôi đã tiến hành tinh sạch Tox1 sau khi hòa tan biến tính trong dung dịch đệm chứa urea 6M. Kết quả điện di SDS-PAGE và Western blot cho thấy, protein Tox1 đã được biểu hiện chính xác và tinh sạch, đạt tiêu chuẩn về độ tinh khiết. Đây sẽ là nguồn nguyên liệu ban đầu cho những nghiên cứu tiếp theo của chúng tôi để chế tạo vacxin tái tổ hợp phòng bệnh tụ huyết trùng lợn do vi khuẩn Pasteurella multocida gây ra.