Tạo adenovirus tái tổ hợp mang đoạn gen chIL-6

Tóm tắt

Sau nghiên cứu công bố năm 2013, chúng tôi đã tách dòng thành công đoạn gen interleukin 6 của gà Việt Nam (chIL-6). Với mục đích tạo adenovirus tái tổ hợp nhằm tạo chế phẩm gây kích ứng miễn dịch cho gia cầm. Sau khi thu nhận đoạn gen từ mô lá lách gà, tách dòng bằng kỹ thuật RT-PCR, đoạn gen chIL-6 được chuyển vào vector con thoi pENTR3C. Vector con thoi pENTR3C mang vùng gen attLl và attL2 tương ứng với 2 vùng gen tạo điểm tương đồng trong vector đích, nhằm tạo ra plasmid tái tổ hợp pAd / CMV-V5-chIL6.

DNA của plasmid tái tổ hợp pAd/CMV/V5- DEST mang gen ChIL-6 được cắt mờ vòng bằng enzym giới hạn Pad. Pad sẽ cắt tại vị trí để chia thành 2 chuỗi lặp ưái (LƯR) và phải (RITR) bao bọc lấy phần DNA tái tổ hợp adenovirus và gen chIL-6 ở giữa. Cuối cùng để tạo ra adenovirus tái tổ hợp, pAd / CMV-V5-chIL6 được xâm nhiễm vào tể bào thận bào thai Dgười HEK293A (human embryonic kidney cell) để bao gói và nhân lên lượng lớn adenovs tái tổ hợp. Sự biểu hiện của ChIL-6 được quan sát sau 48 giờ - 72 giờ sau xâm nhiễm. Adenovirus và đoạn gen ChIL-6 được phát hiện ữong các tế bào HEK293A bằng PCR Kháng nguyên ChIL-6 được xác định nhờ kháng thể Chúng tôi sử dụng một số kĩ thuật ELISA tóm bắt kháng nguyên, kiểm tra adenovirus tái tổ hợp mang gen ChIL6 khi đẵ thực sự được hình thành. Mật độ vứus xác định được là 5x10^ PFU/ml sau khi tinh sạch bằng kit tinh sạch adenovirus ibiPure adeno(Đức).