BIỂU HIỆN VÀ TINH SẠCH PROTEIN TÁI TỔ HỢP CRY8DA DIỆT CÔN RÙNG BỘ CÁNH CỨNG CỦA VI KHUẨN BACILLUS THURINGIENSIS TRONG E. COLI

Tóm tắt

Ở Việt Nam, các nghiên cứu về thuốc trừ sâu BT (Bacillus huringensis) cũng như chuyển gen  Bt vào thực vật chủ yếu tập trung vào phòng trừ sâu hại bộ cánh vảy (cry1, vip …  diệt sâu xanh, sâu tơ, sâu  đục thân…) và chế phẩm BT phòng trừ côn trùng bộ hai cánh (cry4, cry2 diệt bọ gậy …). Các nghiên cứu về chế phẩm BT và chuyển gen  Bt (cry3, cry8…)  kháng bọ cánh cứng vào cây trồng hầu nhưchưa có công bố. Mặt khác, trong chuyển gen thực vật, kỹ thuật PCR thường  được sử dụng  để  đánh giá sơ bộ sự có mặt của gen  được chuyển vào cây trồng nhưng kỹ thuật này chưa thể khẳng  định cây chuyển gen có khả năng biểu hiện gen chuyển thành protein có tính kháng côn trùng hay không. Trong nghiên cứu này, chúng tôi thiết kế và biểu hiện gen  cry8Da kháng côn trùng bộ cánh cứng trong  E. coli với mục đích tạo và tinh chế protein Cry8Da tái tổ hợp để sản xuất kháng thể nhằm kiểm tra protein diệt sâu  ở các cây trồng được chuyển gen cũng như tạo chế phẩm BT diệt bọ cánh cứng.  Đoạn gen  cry8Da mã hóa protein tinh thể độc tố diệt côn trùng bộcánh cứng được gắn vào vector biểu hiện pET32a(+) tại vị trí cắt hạn chế BamHI và SacI. Plasmid tái tổhợp pET32a(+)-cry8Da được biểu hiện trong tế bào E. coli BL21(DE3)LysS. Protein Cry8Da tái tổ hợp thu được có khối lượng phân tử khoảng 96 kDa và biểu hiện tối ưu ở các điều kiện: nhiệt  độ30 ⁰C, nồng  độ IPTG 1 mM trong 4 giờ. Protein tái tổhợp được tinh sạch bằng cột sắc kí ái lực Ni^2+, có nồng độ trung bình 0,45 mg/ml. Sự biểu hiện protein này được khẳng định bằng Western blot với kháng thểkháng ry8Da chuẩn.