TẠO CỘNG HỢP VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG KHÁNG THỂ CHUỘT KHÁNG IgG NGƯỜI GẮN ENZYME HORSERADISH PEROXIDASE ỨNG DỤNG TRONG CÁC PHƯƠNG PHÁP ELISA SỬ DỤNG KHÁNG THỂ NGƯỜI

Tóm tắt

HRP (Horseradish peroxidase) là một enzyme được chiết ra từ rễ cây Cải ngựa (Amoracia rusticana), HRP với vai trò chất đánh dấu được sử dụng nhiều nhất phương pháp gắn cộng hợp vì nó tương đối rẻ, tinh sạch, phát tín hiệu nhanh và có hoạt tính enzyme chuyên biệt rất cao. Ngoài ra do HRP có kích thước và trọng lượng phân tử nhỏ nên ít gây cản trở không gian khi liên kết với kháng nguyên hay kháng thể. Trong các thử nghiệm miễn dịch chẳng hạn như các phương pháp ELISA, để gia tăng độ đặc hiệu cho phản ứng, người ta thường sử dụng kháng thể (KT) thứ cấp gắn enzyme là những KT kháng loài như kháng IgM, kháng IgG,... Vai trò của cộng hợp KT chuột gắn enzyme peroxidase cũng được ứng dụng như một KT kháng loài liên kết đặc hiệu với KT sơ cấp ứng dụng cho bất kỳ mẫu huyết thanh nào kháng với một KN nào đó. Do đó, chúng tôi tiến hành gây đáp ứng miễn dịch trên chuột bằng kháng thể IgG người đã được tinh chế từ huyết thanh của máu cuống rốn với các liều tiêm khác nhau 20 µg, 40 µg và 60 µg/ liều tiêm. Sau khi tinh chế nồng độ kháng thể chuột thu được cao nhất là 0,495 mg/ml. Sau đó, cộng hợp kháng thể chuột kháng kháng thể người đã được gắn với enzyme HRP. Cuối cùng, cộng hợp được thử nghiệm bằng phương pháp ELISA trực tiếp và gián tiếp cho kết quả nồng độ cộng hợp còn giữ hoạt tính là 0,125 mg/ml.

Từ khoá: HRP, cây cải ngựa, đáp ứng miễn dịch, IgG, IgM, ELISA, huyết thanh