Tạo dòng, biểu hiện, tinh sạch và đánh giá khả năng tương tác của 30 amino acid vùng đầu C của độc tố vi khuẩn Clostridium perfringens với thụ thể Claudin-4

Tóm tắt

Vaccine đường uống là chiến lược đang được quan tâm nhất hiện nay trong việc điều trị các bệnh về đường tiêu hóa do nhiễm khuẩn với nhiều ưu điểm nổi bật hơn hẳn so với vaccine truyền thống ở dạng tiêm. Nhằm giải quyết tình trạng dung nạp miễn dịch và sự phân tán kháng nguyên ở ruột, cũng như có thể kích thích đáp ứng miễn dịch hiệu quả, tế bào M hiện diện trong đường ruột là mục tiêu cần nhắm trúng đích cho việc vận chuyển kháng nguyên. Nhiều nghiên cứu cho thấy, 30 amino acid của vùng đầu C độc tố loài Clostridium perfringens (CPE30) có khả năng bám với thụ thể Claudin-4 trên bề mặt tế bào M. Để tạo nguồn nguyên liệu cho việc đánh giá khả năng bám dính của CPE30, gene cpe30 được dòng hóa vào vector pET-gfp bởi hai enzyme cắt giới hạn BamHI và NdeI trên chủng E. coli DH5α. Kết quả biểu hiện và xác nhận sự biểu hiện của protein dung hợp CPE30-GFP được cảm ứng bằng IPTG trong tế bào chủ E. coli BL21(DE3) bằng phương pháp SDS PAGE và lai Western với kháng thể kháng 6xHis Tag, cho thấy khả năng biểu hiện vượt mức protein CPE30-GFP trong tế bào chất và chủ yếu ở dạng tan. Đồng thời, CPE30-GFP đã bước đầu được tinh sạch với độ tinh sạch khoảng 92,3%. Thử nghiệm tương tác in vitro trên chip bán dẫn silicon đo điện trường (SiNW FETs) cho thấy CPE30 GFP tương tác tốt với thụ thể Claudin-4 (R4). Kết quả này tạo tiền đề cho việc nghiên cứu tiếp theo sự tương tác CPE30 với tế bào M in vivo.