Khảo sát khả năng tái sinh của cải xanh (Brassica juncea) và bước đầu chuyển gen nhờ Agrobacterium tumefacien thông qua thấm hút chân không (Vacuum Infiltration)

Tóm tắt

Lá mầm và trụ mầm từ cây cải xanh in vitro 7 ngày tuổi được gây nhiễm khuẩn Agrobacterium tumefaciens bằng máy hút chân không. Ở môi trường Murashige-Skoog (MS) có bổ sung benzyladenin (BA) 1 mg/l, naphthalene acetic acid (NAA) 1 mg/l và AgNO3 4 mg/l cho tỷ lệ chồi tái sinh cao nhất (95%) ở lá mầm; trong khi đó, ở trụ mầm, môi trường có bổ sung 2 mg/l BA và 0,5 mg/l NAA cho tỷ lệ tái sinh chồi cao nhất (64,1%). Môi trường dùng để chọn lọc cây chuyển gen có chứa phosphinothricin (PPT) 3 mg/l. Vi khuẩn được sử dụng cho thí nghiệm này là chủng Agrobacterium tumefaciens EHA 105 chứa plasmid IBT2 mang gen cryIA(c), gen bar và gen gusA. Các chồi tái sinh hình thành cây con và ra rễ được trên môi trường MS có chứa PPT 3 mg/l, sau đó tiến hành kiểm tra các gen được chuyển vào cây con.